我國的非洲豬瘟疫情自2018年報道至今，國內非洲豬瘟防控工作始終未曾懈怠。在臨床防控過程中，非洲豬瘟實驗室檢測工作至關重要，準確的檢測結果對非洲豬瘟疫情的早期發現、快速處理及后期復養均可提供科學指導。那么如何才能做到科學采樣？本期【非瘟講堂】將和大家一起探討。

    非洲豬瘟實驗室檢測工作中，檢測對象科學采樣是前提，下表1是針對豬群推薦的采樣方法，根據不同采樣對象選擇合理的采樣方法。

表1 常用采樣方法推薦表

    本篇為豬只采樣篇，介紹非洲豬瘟防控中4種常用豬只采樣方法，分別為口咽拭子采樣、口腔液采樣、尾根/陰戶血拭子采樣及淋巴組織采樣，具體準備工作及操作方法參考下文。

必需物品套裝

    一次性隔離服、雨靴、一次性PE手套、一次性鞋套、一次性醫用口罩、75%酒精消毒棉球或碘伏等消毒液、信息登記表、記號筆、冰袋、保溫箱。

一、口咽拭子采樣操作SOP

   （一）物品準備

    必需物品套裝、專用口咽拭子（長度＞50cm）或自制拭子（輸精管和無菌紗布制作）、一次性長臂手套、50ml收集管、自封袋、核酸保護液。

   （二）具體步驟

    1.準備工作：采樣前根據采樣目的制定采樣方案和路線，帶足所需物品，減少盲目走動。采樣人穿戴好隔離服、雨靴及口罩，先佩戴一次性乳膠手套后，再戴一次性長臂手套，以便及時更換；

    2.使用專用口咽拭子（長度＞50cm），或者自制口咽拭子（具體可參考下圖），拭子斜向上插入口腔深部近咽喉處，近扁桃體周圍反復摩擦取樣，待徹底濕潤后取出（以清亮粘稠狀液體為準）；

    3.將拭子頭部掰斷或剪斷，（自制拭子放入自封袋內取出紗布，擠壓紗布，把液體轉移到2ml離心管里）。更換新的一次性長臂手套，再對下一頭豬采樣；

    4.記錄送檢：在管體表面做好信息記錄，相應信息做好登記，冷藏保存盡快送檢；

    5.廢物處理：每次采樣后立即更換手套，避免交叉污染，廢棄物品及時無害化處理；

    6.消毒：采樣后安排人員對采樣路線的道路及周邊區域進行消毒處理。

   （三）注意事項

    1.采取不保定豬只采樣，降低采樣過程的散毒風險；

    2.建議在飼喂前采樣，或飼喂結束2小時后采集，避免飼料殘渣影響檢測結果；

    3.3小時內可檢測無需加核酸保護液，若不能則務必加入，送檢過程避免反復凍融；

    4.對無法采集口咽拭子的豬只，可采集肛拭子、食槽、水槽及前驅區域的環境樣本。

    自制口咽拭子，咽拭子頭部大小可根據豬只大小確定，參考如圖示：

二、口腔液采樣操作SOP

   （一）物品準備

    必需物品套裝、無菌棉繩（禁止使用消毒藥浸泡）、核酸保護液、自封袋。

   （二）具體步驟

    1.準備工作：采樣前根據采樣目的制定采樣方案和路線，帶足所需物品，減少盲目走動。采樣人穿戴好隔離服、口罩、雨靴，先佩戴一次性乳膠手套后，再戴一次性PE手套，以便及時更換；然后對道路、采樣區域周邊噴灑消毒劑后再采樣；

    2.將采樣專用無菌棉繩一端打結掛到豬欄中豬只易接觸處（該處遠離水槽和食槽），繩子下端距離地面高度與豬肩胛骨同高，以便豬只能咬到棉繩；采樣密度為每10頭豬一個棉繩；

    3.繩子懸掛時間建議為30~40分鐘，最大程度確保同一欄中80%以上豬只咀嚼過棉繩；

    4.摘取棉繩后，將棉繩裝入自封袋密封（可事先存有1~2ml核酸保護液），取回；對走過的道路區域進行消毒藥噴灑消毒；

    5.記錄送檢：在自封袋表面做好信息記錄，相應信息做好登記，冷藏保存盡快送檢；

    6.廢物處理：每次采樣后立即更換手套，避免交叉污染，廢棄物品及時無害化處理；

    7.消毒：采樣后安排人員對采樣路線的道路及周邊區域進行消毒處理。

   （三）注意事項

    1.根據豬群數量放置棉繩（10頭/根），不可交叉；

    2.建議在早上飼喂前采樣，或飼喂結束2小時后采集唾液，避免飼料殘渣影響檢測結果；

    3.收集口腔液前需觀察棉繩濕潤度，只有在充分濕潤后方可收集；

    4.3小時內可檢測無需加核酸保護液，若不能則務必加入，送檢過程避免反復凍融；

    5.唾液的收集在實驗室或在偏僻的、易于消毒的地方進行，之后對分樣區域進行消毒，禁止在豬舍內收集，防止污染；

    6.個別發病豬精神萎靡，不會啃咬棉繩，可單獨采集咽拭子/血拭子和接觸的環境樣本送檢。

三、尾根/陰戶血拭子采樣操作SOP

   （一）物品準備

    必需物品套裝、樣品保存管、一次性采血針、生理鹽水。

   （二）具體步驟

    1.準備工作：采樣前根據采樣目的制定采樣方案和路線，帶足所需物品，減少盲目走動。采樣人穿戴好隔離服、雨靴及口罩，先佩戴一次性乳膠手套后，再戴一次性PE手套，以便及時更換；然后對采樣區域周邊噴灑消毒劑后再采樣；

    2.在尾根或陰戶用一次性采血針刺破，擠出適量血液，用無菌棉拭子吸血后，消毒棉球按壓出血處30秒，止血消毒處理；

    3.將血拭子頭部折斷放入樣品保存管中（含1~1.5ml生理鹽水）；

    4.記錄送檢：在樣品保存管表面做好信息記錄，相應信息做好登記，冷藏保存盡快送檢；

    5.廢物處理：每次采樣后立即更換手套，避免交叉污染，廢棄物品及時無害化處理；

    6.消毒：采樣后安排人員對采樣路線的道路及周邊區域進行消毒處理。

   （三）注意事項

    1.血拭子通常采集尾根或陰戶拭子，耳緣血拭子且易導致交叉污染，不建議采用；

    2.陽性個體血中病毒含量較高，風險較大，針刺前后做好部位清理及消毒處理。

四、淋巴組織采樣操作SOP

   （一）物品準備

    必需物品套裝、生理鹽水，解剖刀、死豬專用處理袋、樣品保存管。

   （二）具體步驟

    1.采樣前根據采樣目的制定采樣方案和路線，帶足所需物品，減少盲目走動。采樣人穿戴好隔離服、雨靴及口罩，先佩戴一次性乳膠手套后，再戴一次性PE手套，以便及時更換；然后對采樣區域周邊噴灑消毒劑后再采樣；

    2.淋巴組織采樣通常指腹股溝淋巴結的采樣，一般針對死亡豬只采樣。首先將死豬專用處理袋包裹轉移至無害化處理區，由采樣人員使用解剖刀在豬腹股溝處取部分淋巴組織，置于樣品保存管中（含0.5~1ml生理鹽水），之后密封袋口及時對死豬無害化處理；

    3.記錄送檢：在樣品保存管表面做好信息記錄，相應信息做好登記，冷藏保存盡快送檢；

    4.廢物處理：每次采樣后立即更換手套，避免交叉污染，廢棄物品及時無害化處理；

    5.消毒：采樣后安排人員對采樣路線的道路及周邊區域進行消毒處理。

   （三）注意事項

    1.一頭豬一把解剖刀，用后統一消毒滅菌；

    2.病死豬采樣在處理袋中進行，防止液體流出造成污染。

    以上為豬只采樣的準備工作、具體操作步驟及相關注意事項。針對不同欄位、不同群體及不同健康度的豬只建議選擇科學的采樣方法，豬只科學采樣是非洲豬瘟早期發現、快速排查及準確診斷的前提，也是豬場實現精準剔除的重要環節及工作。